椒目油对豚鼠哮喘模型肥大细胞和类胰蛋白酶的影响

椒目油对豚鼠哮喘模型肥大细胞和类胰蛋白酶的影响

              作者：谢柏梅，戚好文，赵睿，林小萍    

【关键词】  椒目油；哮喘；肥大细胞；类胰蛋白酶

     　　Effects of zanthoxylum seed oil on mast cells and tryptase of asthmatic models in guinea pigs

    【Abstract】 AIM: To explore the effects of zanthoxylum seed oil （ZSO） on mast cells in lung tissue and tryptase in plasma of asthmatic models in guinea pigs and to provide theoretical basis for the treatment of asthma by using ZSO. METHODS: This experiment included 4 groups: normal control group, asthmatic model group, dexamethasone treatment group and ZSO treatment group, 9 guinea pigs involved in each group. Asthmatic models in guinea pigs were constructed by immunization of intraperitoneal injection with ovalbumin (OVA) and challenge of inspiration with nebulized OVA. Mast cells were observed under a microscope and tryptase levels were measured by antibody against tryptase with UniCAP100 system. RESULTS: The numbers of mast cells and the percentage of degranulation of mast cells in lung tissue and the plasma levels of tryptase of asthmatic model group in guinea pigs ［（14.87±4.67）,（42.85±5.99）％ and （119.78±12.50）］ were significantly higher than those of normal control group ［（2.38±0.52）,（24.91±9.79）％ and （88.78±4.74）］ (P<0.01). While the above indices in the ZSO group ［（6.38±1.06）,（25.44±8.21）％ and （93.22±6.40）］ and dexamethasone group［（6.63±1.41）,（25.33±6.14）％ and （92.10±7.11）］ were significantly lower than those of the asthmatic model group (P<0.01). There was no statistically significant difference in the above indices between ZSO group and dexamethasone group （P＞0.05）. CONCLUSION: ZSO could efficiently decrease the numbers of mast cells and the percentage of degranulation of mast cells in lung tissue and the plasma levels of tryptase of asthmatic guinea pigs, so that it could effectively treat asthma.

    【Keywords】 zanthoxylum seed oil；asthma；mast cell；tryptase

    【摘要】 目的：探讨椒目油（ZSO）对豚鼠哮喘模型肺组织中肥大细胞及血浆类胰蛋白酶的影响，为ZSO治疗哮喘提供理论依据. 方法：实验分为4组：对照组，哮喘模型组，地塞米松治疗组和ZSO治疗组. 用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型. 镜下观察肺组织肥大细胞数量及脱颗粒现象. 运用UniCAP100全自动体外变应原检测仪测定豚鼠血浆类胰蛋白酶含量. 结果：哮喘模型组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为（14.87±4.67）,（42.85±5.99）,（119.78±12.50），与对照组（2.38±0.52）,（24.91±9.79）,（88.78±4.74）相比均升高，差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为（6.38±1.06）,（25.44±8.21）,（93.22±6.40）,与地塞米松治疗组豚鼠肺高倍视野肥大细胞数、脱颗粒百分率及血浆类胰蛋白酶含量分别为（6.63±1.41）,（25.33±6.14）,（92.10±7.11）,与哮喘模型组相比显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01). ZSO与地塞米松两治疗组之间上述指标相比差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论：ZSO能有效地减少哮喘豚鼠肺肥大细胞数量，抑制肥大细胞脱颗粒、释放类胰蛋白酶，从而能有效地治疗哮喘.

    【关键词】 椒目油；哮喘；肥大细胞；类胰蛋白酶

    支气管哮喘是一种复杂的慢性呼吸道炎症，哮喘患者气道平滑肌可见大量肥大细胞浸润并呈脱颗粒状态［1］. 肥大细胞特有的类胰蛋白酶是肥大细胞脱颗粒的标志物，具有增高气道反应性、促进炎症细胞聚集及刺激多种细胞增殖［2］的作用，已成为哮喘研究的一大热点. 中药椒目治疗哮喘历史悠久，疗效显著，但其作用机制尚不清楚. 我们通过探究椒目油（zanthoxylum seed oil, ZSO）对豚鼠哮喘模型肥大细胞及其所释放的类胰蛋白酶的作用，揭示椒目治疗哮喘的作用机制，为ZSO的临床应用提供理论依据.

    1材料和方法

    1.1材料健康雄性豚鼠36只，体质量(250±50) g购于第四军医大学实验动物中心；ZSO由第四军医大学西京医院药剂科提供（批号：20050221）；卵白蛋白（ovum albumin，OVA）购于美国Sigma公司；401AI超声雾化器购于上海鱼跃医疗设备有限公司；UniCAP100全自动体外变应原检测仪为瑞典PHARMACIA公司产品；UniCAP Tryptase试剂盒购于瑞典PHARMACIA公司.

    1.2方法

    1.2.1豚鼠哮喘模型的建立按参照文献［3］的方法操作. 即豚鼠腹腔注射含有100 g/L OVA及100 g/L氢氧化铝凝胶的生理盐水1 mL致敏，第15日用10 g/L OVA溶液超声雾化激发，每日1次，连续7 d. 每次激发直到豚鼠出现咳嗽、呼吸急促，腹肌紧张等哮喘症状为止.

    1.2.2实验分组及处理将豚鼠随机分为4组：对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和ZSO治疗组，每组9只. 对照组用等量生理盐水注射和雾化吸入; 哮喘模型组用OVA致敏激发; 地塞米松治疗组致敏激发方法同哮喘模型组，但激发后立即给予5 g/L地塞米松溶液雾化吸入5 min; ZSO治疗组致敏方法同哮喘模型组，激发后立即给予ZSO以3 mL/kg灌胃.

    1.2.3类胰蛋白酶测定各组豚鼠末次激发后，从心脏直接抽血5 mL，立刻置入含EDTA的抗凝管中混匀，静置30 min后以1500 r/min离心10 min，留取血浆冻存于-80℃. 运用UniCAP100全自动体外变应原检测仪及UniCAP Tryptase试剂盒测定血浆中类胰蛋白酶的含量.

    1.2.4细胞形态学观察放血处死动物，取右肺下叶相同部位组织石蜡包埋切片，行HE和Giemsa染色［4］. Giemsa染色后于低倍镜下选择特殊染色阳性的细胞相对密集区，计数9个高倍视野中的肥大细胞总数，计算每个高倍视野中的平均细胞数. 计算肥大细胞脱颗粒百分率.

    统计学处理：所有数据均以x±s表示. 将原始数据输入SPSS 11.0统计软件包，方差齐同，组间比较运用LSDt检验；方差不齐，采用非参数方法进行组间比较.