肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定及超广谱β-内酰胺酶的检测 【摘要】 目的 在肺炎克雷伯杆菌进行分离鉴定的基础上，探讨该菌产生超广谱β-内酰胺酶的情况，为临床合理用药提供依据。方法 用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管对分离后103株肺炎克雷伯杆菌进行鉴定，采用头孢噻肟和头孢噻肟/棒酸、头孢他啶和头孢他啶/棒酸检测超广谱β-内酰胺酶。结果 在103株肺炎克雷伯杆菌中，26株检测出超广谱β-内酰胺酶，检出率达25.2%。结论 该地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌分离率较高。
【关键词】 肺炎克雷伯杆菌； 超广谱β-内酰胺酶
Isolation and identification of Klebsiella pneumoniae from infectious specimens and detection of extended-spectrum β-lactamase producing strains
【Key words】 Klebsiella pneumoniae; super-extended-spectrum β-lactamase
肺炎克雷伯杆菌是医院内感染和社区感染的重要病原菌［1］。近年来，肺炎克雷伯杆菌对多种抗生素的耐药性逐步上升，其中超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase, ESBL)的产生, 是其耐药机制之一。ESBL能水解青霉素类和头孢菌素类抗生素［2］。因此，笔者对2005年9月～2006年6月吉林大学附属中日联谊医院和长春市中医学院附属医院送检的临床标本分离鉴定肺炎克雷伯杆菌，并对其进行超广谱β-内酰胺酶检测，为临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 2005年9月～2006年8月吉林大学附属中日联谊医院和长春市中医学院附属医院分离的肺炎克雷伯杆菌103株，菌株按规定方法保存运送，统一保管。标准菌株：大肠埃希氏菌ATCC25922，肺炎克雷伯氏菌GY2000。
1.2 培养基 普通营养琼脂、MH培养基和超广谱β-内酰胺酶测定盒均购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.3 抗生素 硫酸庆大霉素（购自天津药业焦作有限公司），乳酸环丙沙星（购自湖南科伦制药有限公司），氧氟沙星（购自贵州科伦药业有限公司），青霉素钠、氨苄西林钠（购自华北制药股份有限公司），头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢曲松钠（购自上海新先锋药业有限公司），头孢吡肟(购自大连中信药业股份有限公司)，阿奇霉素（购自杭州澳亚生物技术有限公司），乳糖酸红霉素（购自大连美罗大药厂），头孢拉定（购自深圳市制药厂）。
1.4 肺炎克雷伯杆菌分离鉴定 常规分离临床标本纯培养，然后进行革兰染色，肠杆菌科细菌生化编码鉴定管（硫化氢，苯丙氨酸，葡萄糖酸盐，蛋白胨水，葡磷胨水，枸橼酸盐，尿素，半固体，赖氨酸，鸟氨酸，氨基酸对照，棉子糖，山梨醇，侧金盏花醇，木胶糖）进行鉴定，根据肠杆菌科细菌生化鉴定编码册，最后鉴定细菌。
1.5 抗生素敏感试验 采用平皿二倍稀释法进行药敏试验。
1.6 ESBLs检测 按照美国NCCLS2000年药敏试验操作标准推荐的方法进行检测。采用头孢噻肟纸片和头孢噻肟＋棒酸纸片、头孢他啶和头孢他啶＋棒酸纸片。单头孢菌素纸片和混有棒酸的头孢菌素纸片抑菌环直径相差5mm以上, 判定为ESBLs 阳性株。
2 结果
2.1 肺炎克雷伯杆菌抗生素敏感试验结果 从临床感染性标本中分离出肺炎克雷伯杆菌103株，抗生素敏感试验结果见表1。
表1 103株肺炎克雷伯杆菌的药敏结果（略）
2.2 超广谱β-内酰胺酶检出情况 在103株分离鉴定后的肺炎克雷伯杆菌中，26株检测出超广谱β-内酰胺酶，检出率达25.2%，见表2。
肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定及超广谱β-内酰胺酶的检测